PCR 已逐渐成为分子生物学家的日常
工作。 由于多种因素可影响 PCR，要求一
种体系满足所有的条件并不合理。当您在
PCR 过程遇到困难，请根据以下所列事项检
查您的工作，很多时候，这些检查项目能解
决您的问题。
1. 大多数时候，PCR失败是因为准备不当
或初始材料不纯而引起的，比如dNTP，
引物，模板DNA。有些情况下，模板DNA
降解和引物被Dnases污染是另外一种
可能原因。 请逐个检查您使用的所有溶
液及初始材料。溶液配制计算不正确是
导致PCR失败的常见原因。请检查您的
计算是否正确。
2. 重复PCR实验。PCR混合液中加有许多
溶液，不小心错误加入一些溶液是另一
个常导致PCR失败的原因，如果您在前
面指出的问题中未能发现任何错误，请
您重复一次您的PCR实验。
3. 如果您重复一次PCR依然失败，请您更
换实验中的所有溶液及初始材料，并再
次重复。很多时候，即使您没发现原因，
问题也能得到解决。
4. 如果上述三个步骤都无法解决您的问
题，您需要优化您的PCR。您应该考虑
的主要因素有：Mg2+浓度。退火温度。
如果您的引物长度在17-25个碱基之间，
您可使用下列等式计算Tm值：
Tm=4￥ (G+C) + 2￥ (A+T)。
如果您的引物大于 25 个碱基，请使用下列等
式：
Tm=81.5+16.6(log
[J+])+0.41(%G+C)-600/L-0.63 (%FA).
J+= concentration of monocations.
L=length of primers in bases.
%G+C=引物中 G+C 含量。
FA=formamide.
一些添加剂有助于解决您的问题，比如 such
DMSO，甲酰胺等。